免疫組化是一種運(yùn)用免疫學(xué)原理進(jìn)行的一種抗原抗體反應(yīng)。那免疫組化的具有原理是什么呢?免疫組化的作用又有哪些呢?今天小編就來為大家一一介紹一下。想知道的朋友不妨就來看一下吧。
相信大家都知道，一種技術(shù)都尤其原理的，不是嗎?那免疫組化的原理是什么呢?
根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng)，前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合，后通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。
免疫組化分類
1.免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量。
2.免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
是目前免疫組織化學(xué)研究中常用的技術(shù).基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進(jìn)行定位或定性研究。
3.免疫膠體金技術(shù)
就是用膠體金標(biāo)記一抗，二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針對組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性，定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記的定位研究。
免疫組化作用
以上我們也是知道免疫組化的原理以及分類了，那免疫組化有什么作用呢?下面我們就一起來看一下。
標(biāo)本
實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片(病理切片和組織芯片)和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。
其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本常用、基本的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔，供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中首選的組織標(biāo)本制作方法。
抗體
免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體，單克隆抗體是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
常用染色方法
根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法常用。
免疫組化操作步驟
免疫組化的操作步驟有哪些呢?相信很多人都是不知道的，既然不知道，那下面我們就一起來看一下吧。
1.切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行。
2.緩沖液洗3min/2次。
3.為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在HydrogenPeroxideBlock中孵育10-15分鐘。
