3.鑒別方法
AOB的外觀為黃色或棕黃色的粉末或顆粒,可溶于水和乙醇,略溶于丙酮、正丁醇、乙酸乙酯等;AOB有吸濕性,在干燥狀態(tài)時相當穩(wěn)定?;瘜W(xué)試劑鑒別:取本品0.5g溶于100mL95%的乙醇中,按下法鑒別:取上述溶液1mL,加1%FeCl3-乙醇溶液2~3滴,應(yīng)顯深藍色或藍紫色。取上述溶液1mL,加1%AlCl3-乙醇溶液2~3滴,應(yīng)呈鮮黃色;取本品0.5g,加入10mL乙醚,超聲波輔助萃取30秒,過濾。取濾液1mL,置70~90℃的水浴中揮干乙醚后,依次加入2%的間二硝基苯溶液(用95%乙醇配制)和2.5mol/L的KOH水溶液各1mL,立即出現(xiàn)微紅色,放入上述熱水浴中,迅速變成深紫紅色。經(jīng)溴化鉀壓片后的紅外光譜圖顯示,在3400、2900、1610、1520、1080cm-1等附近有特征性吸收。將其溶于光譜純甲醇后,在200~600nm的波長范圍內(nèi)進行掃描,紫外光譜圖顯示,在240~400nm區(qū)域有兩個主要的吸收峰,其中在240~280nm之間有一強吸收峰,在300~350nm之間有一次強吸收峰,呈現(xiàn)了植物黃酮制劑的典型特征。
4.安全性評價
竹葉在中國乃至東南亞的廣大地區(qū)有著長期的食用和藥用歷史,1998年(淡)竹葉被衛(wèi)生部批準列入了“藥食兩用的天然物名單”,以竹葉黃酮為內(nèi)容物的“竹康寧”膠囊和片劑也分別于1999年和2002年獲得了保健食品的批準文號。
浙江省疾病預(yù)防控制中心按照衛(wèi)生部GB15193-1994《食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》對力夫牌竹葉抗氧化。
竹葉物(AOB)進行了為期一年多的試驗研究,結(jié)果表明:第一階段大、小鼠急性及口毒性半數(shù)致死量(LD50)雌雄兩性均大于10000mg/kg體重,按急性毒性分級標準判定,屬實際無毒類。第二階段Ames試驗結(jié)果為陰性,小鼠骨髓細胞微核試驗和小鼠精子畸形試驗結(jié)果均為陰性,提示該樣品無致突變性。第三階段大鼠90天喂養(yǎng)試驗設(shè)低、中、高三個劑量組,分別相當于人大可能攝入量(860mg/d)的100、200、300倍,試驗結(jié)果表明,各項指標均未見明顯毒性反應(yīng),AOB的大無作用劑量為4.3g/kg體重;傳統(tǒng)致畸試驗顯示各劑量組各項指標均未見有明顯的母體毒性和胚胎毒性、致畸性;大鼠一代繁殖試驗?zāi)阁w效應(yīng)、胎仔效應(yīng)各項指標均未見明顯毒性反應(yīng)。代謝試驗表明,AOB中四種碳苷黃酮在大鼠胃腸道內(nèi)均無直接吸收,灌胃后各個時相血漿和主要組織器官(肝、腎、腦及肌肉組織)均無檢出,灌胃后0.5h、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h在胃腸道及其內(nèi)容物中,四種碳苷的回收率分別為83.3%、68.8%、65.0%、61.1%、59.9%、59.1%、57.8%、53.7%、51.7%;一次性灌胃給予受試物,24h后從糞便中檢出的原型物占攝入量的27.6%,尿液中未見原形物排出。AOB中的另一主要羥基香豆素類組分則主要經(jīng)血液途徑吸收。灌胃后各時相在大鼠肝臟、腦及肌肉組織均無檢出,在血液及腎臟從有檢出;給予受試物24h后該組分在尿液中檢出1.9%,在糞便中未檢出。